核酸检测在我国采供血机构中用病毒采样管检测的病毒种类、方法及检测模式-尊龙凯时官方网站下载

一、核酸检测的病毒类型《献血者健康检查要求》规定采供血机构中检测的病毒为:人类免疫缺陷病毒(hiv)死亡情况1)体外生存力差;2)血液和体液中生存力强，乙型肝炎病毒(hbv)、丙型肝炎病毒( hcv)。它们的分子生物学特征:hiv蛋白有gpl 60, gp120, gp41 , p17以及p24 ( gag基因)，病毒基因组是2条相同的正义rna，含pol,env,tat基因，在病毒蛋白表达和病毒复制中起重要作用，hiv-2基因结构与hiv-1核普酸序列有差别;hbv基因组长约3. 2 kb，为部分双链环状dna病毒;hcv为单股正链rna病毒，hcv rna大约有9500一10000hp组成，5'3’非编码区( ncr)分别有319 -341 hp，和27一55 hp，可能与基因复制有关。目前国内外检测核酸检测方法必须与相应的病毒基因相对应。

二、核酸检测的2种技术目前应用于血液检测中的nat主要为聚合酶链反应(pcr)技术和转录介导的扩增(tma)技术，聚合酶链反应(pcr)是体外模拟自然dna半保留复制过程的核酸扩增技术，扩增严格遵守碱基配对原则的半保留复制，因而具有高特异性;在pcr反应中模板dna以指数级迅速增加，因而pcr具有高灵敏度;taqdna聚合酶酶( tagdna polvmerase)的使用使pcr技术可以自动化完成，各种高效pcr仪相续问世使pcr得到了广泛的应用。在国外己开展nat血液检测的19个国家(地区)中，有14个国家或地区使用了pcr技术。tma(转录介导的扩增技术)，可以rna或dna为模板，利用rna聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下进行扩增，产物为rna。该技术在每1循环可产生模板的100一1000个拷贝转录本，15一30 min可将模板扩增约10倍，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。tma扩增效率高，操作简便，还可对多种相关病原多重检测，适于高通量检测，在国外进行nat检测的国家(地区)中也得到了广泛应用。

三、核酸检测的模式在检测模式方面，主要有混样和单样品检测模式。为降低成本，在保证灵敏度的前提下，往往将一定数量的标本混合加样后用尊龙凯时官方网站下载-凯时kb88手机客户端检测，如果该混合样品为阳性，则将该混合样品进行单个检验。在国外进行核酸检测的国家(地区)中大多采用混样的检测模式。龚晓燕架使用罗氏cobas m px混样及单人份检测模式对献血者核酸检测效果的研究表明单人份检测核酸检出率高于6人份混样检测。而国外的核酸检测发展表现出混合样本量逐渐减少的趋势。单样品检测可以防止低拷贝的标本漏检，而且避免了混合样本检测出现阳性结果时的拆分，保证供血的时效性。为进一步降低输血残余风险，目前国外核酸检测的混样规模有缩小的趋势，美国正在考虑对hiv检测由8人份混样缩至单个样本核酸检测，新西兰、葡萄牙和新加坡实行单人份核酸检测，国内目前试行核酸检测病毒筛查的血站引用的技术各有不同，混样规模从6一8人份不等。